WO2012018145A2

WO2012018145A2 - Ｑｏｌ改善剤

Info

Publication number: WO2012018145A2
Application number: PCT/JP2011/068339
Authority: WO
Inventors: 光彦川口; 義人畝; 研介後藤; 太乙郭; 喜治角田; 栄一平野
Original assignee: 株式会社日本生物製剤
Priority date: 2010-08-05
Filing date: 2011-08-04
Publication date: 2012-02-09
Also published as: WO2012018145A3

Abstract

肝細胞癌患者のＱＯＬ（Ｑｕａｌｉｔｙ　ｏｆ　ｌｉｆｅ）改善剤を提供する。本発明のＱＯＬ改善剤はヒト胎盤抽出物を含有することを特徴とする、肝細胞癌患者のＱＯＬ改善剤であり、特に肝機能改善剤（例えばグリチルリチン酸塩）と併用するのが好ましい。本発明のＱＯＬ改善剤によれば、肝癌細胞を縮小させ、患者の自覚症状を改善し、ＱＯＬを向上させることができるので、末期の肝細胞癌も含め、肝細胞癌の治療において格別な効果をもたらす。

Description

ＱＯＬ改善剤

　本発明はＱＯＬ（Ｑｕａｌｉｔｙ　ｏｆ　ｌｉｆｅ：生活の質）改善剤に関する。より詳細には、ヒトの胎盤抽出物（胎盤分解物、胎盤水解物、胎盤エキス、胎盤加水分解物などとも称される）を含有し、安価で、肝臓癌（肝細胞癌）患者のＱＯＬを向上させることのできるＱＯＬ改善剤に関する。

　原発性肝癌は、肝臓の実質である肝細胞から発生する肝細胞癌と、肝臓内の胆管から発生する胆管細胞癌に大別され、原発性肝癌の約９０％は肝細胞癌である。
　肝細胞癌の８０％~９０％は、肝硬変あるいはその前段階である慢性肝炎に合併して発生する。肝細胞癌の前段階である慢性肝炎に対しては、その原因（ウイルス、アルコール、非アルコール、薬物、自己免疫性など）に応じた治療が行われる（例えば、非特許文献１の１１頁、１８~１９頁、２６頁、３６~３７頁など参照）。
　Ｂ型慢性肝炎患者には、年齢、ウイルス量、ＧＰＴ（ＡＬＴ）値、炎症の程度、線維化の程度等の病態を考慮して、ペグインターフェロンを含むインターフェロン製剤、あるいはラミブジン等の核酸関連化合物、さらにはウルソデオキシコール酸、グリチルリチン酸モノアンモニウム等の肝機能改善剤（肝庇護剤）などの単独あるいは併用療法が多用されるが、ラミブジンは胎児への影響や長期投与による耐性ウイルスの出現などが知られている。
　一方、Ｃ型慢性肝炎患者の場合も、年齢、ウイルス量、ＧＰＴ値等の病態を考慮して、ペグインターフェロン製剤、あるいはリバビリン（核酸関連化合物）、さらにはウルソデオキシコール酸、グリチルリチン酸モノアンモニウム等の肝機能改善剤などの単独あるいは併用療法が多用されるが、副作用により治療を断念する例も少なくない。
　ちなみに、高ＨＣＶ−ＲＮＡ値のＣ型肝炎患者にリバビリン単独あるいはペグインターフェロンとリバビリンを併用投与した場合、副作用による脱落率は１７％（６５歳以上は２８％）にも達する。副作用による治療断念の理由は、貧血・ヘモグロビン減少が最も多い。貧血症状を来すと、リバビリン投与は不可能になる。その他、発疹・掻痒症、うつ状態を含む精神症状、肝発癌なども中止の理由となっている。
　肝硬変に対しては、Ｂ型由来の場合は抗ウイルス療法を、Ｃ型由来の場合はインターフェロン療法を行うこともあるが、治療の基本は利尿剤の投与など対症的である。
　上述した薬物療法によって慢性肝炎患者、肝硬変患者のＱＯＬが向上したという報告は多くない。ウイルス性肝炎の場合、ウイルスの消失、ＧＰＴ値の低下が目標である。そのためには、副作用を少なくし、標準的治療方法（例えば、ペグインターフェロンとリバビリンとの併用療法）をいかに持続させうるかがポイントになる。
　肝炎・肝硬変が進展した肝細胞癌は、ウイルス性に限らず、再発率が高い疾患であり、転移性肝細胞癌は予後が悪い疾患である。現在、種々の治療法が試みられており（前掲非特許文献１の第６２~６９頁参照）、例えば早期癌に対しては、肝切除、内科的局所治療（経皮的エタノール局所療法、経皮的マイクロ波凝固療法、ラジオ波焼灼療法等）が根治的に行われるようになった。
　進行癌に対しては、ＴＡＥ（肝動脈塞栓療法）、肝動注化学療法等による治療が行われている。
　化学療法としては、抗肝癌剤（例えば、ミトキサントロン酸塩、ミリプラチン水和物、シスプラチンなど）が使用されており、最近、分子標的薬ソラフェニブ（商品名：ネクサバール、登録商標）が承認、製造販売されるなど、薬物療法にも進展はみられつつある。
　肝細胞癌の発生機序について多くの知見が集積されているにもかかわらず、依然として不明な点が多いこともあって、治療法は確立されていない。このように、肝細胞癌を制圧することは極めて困難な状況であり、よって長年、入退院を繰り返しながら治療を受ける患者や、通院で治療を受ける患者に対しては、ＱＯＬの維持・改善をとくに考慮する必要がある。そのＱＯＬの維持・改善対策についても多面的な検討は行われているが、薬物療法の面では、前記抗肝細胞癌剤の副作用（例えば、ＧＯＴ値の上昇のような肝機能障害、白血球や血小板の減少のような血液障害、食欲不振のような消化器障害など）が高頻度に発生することに加え、高薬価であることが患者の経済的負担になっており、ＱＯＬの維持・改善対策推進の大きな障害になっている。
　なお、特許文献１には、カゼイン、ペプトン、ＲＮＡ及び血清アルブミン分解生成物を含有する組成物を投与することからなる各種癌患者のＱＯＬの改善が記載されているが、肝細胞癌に対する効果は明らかにされていない。

特表２００８−５４２３６９号公報

日本肝臓学会編、慢性肝炎の治療ガイド　２００８、文光堂、平成２１年１０月１６日発行

　本発明は、上記の課題に着目して行われたものである。その目的は肝細胞癌患者の経済的負担が少なく、肝細胞癌の増殖を抑制あるいは縮小、ＱＯＬを向上させ、結果として、肝細胞癌患者の生存率を延長させることにあり、本発明者らが鋭意検討したところ、ヒト胎盤抽出物が肝細胞癌患者のＱＯＬを著しく改善することを見出した。即ち、本発明は胎盤抽出物を有効成分として含有する、肝細胞癌患者用のＱＯＬ改善剤を提供することにある。

　上記の課題を解決するためになされた本発明の要旨は、ヒト胎盤抽出物を含有することからなる、肝細胞癌患者のＱＯＬ改善剤である。
　上記の肝細胞癌患者は、インターフェロン製剤及び核酸関連化合物製剤を含めて肝機能改善剤を投与されている患者であってもよく、当該肝機能改善剤としては、グリチルリチン酸塩、ウルソデオキシコール酸、アデノシン三リン酸塩、フラビンアデニンジヌクレオチド、ジクロロ酢酸ジイソプロピルアミン、グルクロノラクトン、グルタチオン、マロチラート、メチルメチオニンスルホニウムクロリド、ポリエンフォスファチジルコリン、プロトポルフィリン塩、分岐鎖アミノ酸製剤、肝水解物、インターフェロン製剤及び核酸関連化合物製剤から選ばれた少なくとも１種が例示される。更に、ヒト胎盤抽出物としてはラエンネック（商品名、登録商標）が好適に使用される。
　また、本発明は、ヒト胎盤抽出物の有効量を、肝細胞癌患者に投与する工程を含む、ＱＯＬの改善方法であり、肝細胞癌患者のＱＯＬを改善するための剤を調製するためのヒト胎盤抽出物の使用である。

　後記実施例に示されるように、胎盤抽出物（例えばラエンネック）は肝細胞癌株の増殖を阻害する作用を有しており、特に肝機能改善剤（例えばグリチルリチン酸モノアンモニウム）と併用すると、それらの相乗効果により肝細胞癌株の増殖を顕著に抑制し得る。また、胎盤抽出物と肝機能改善剤との併用投与により、長期間の投与が可能になり、その結果、癌細胞を縮小させ、患者の自覚症状を改善し、ＱＯＬを向上させることができる。さらには、胎盤抽出物は、静脈内単独連続投与によっても、癌細胞を縮小させることができる。
　また、胎盤抽出物は肝機能改善剤と併用することにより、肝機能改善剤の単独投与より、より長期間の肝機能改善剤の投与が可能になり、慢性肝疾患患者の肝機能が改善し、ＱＯＬが一層向上する。
　しかも、これら投与によって発生する副作用は少ないという特長を有している。従って、本発明によれば、ラエンネックの薬価が低いことを考慮すると、末期の肝細胞癌も含め、肝細胞癌の治療において格別な効果をもたらす。

　図１はラエンネックのヒト肝細胞癌増殖への抑制効果を示す図である。図中、（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）はそれぞれＨｅｐＧ２、ＨＬＥ及びＨｕｈ−７細胞を示す。
　図２は、ラエンネックとグリチルリチン酸モノアンモニウムの併用によるヒト肝細胞癌増殖への抑制効果を示す図である。図中、（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）はそれぞれＨｅｐＧ２、ＨＬＥ及びＨｕｈ−７細胞を示す。また、□はグリチルリチン酸モノアンモニウム単独、●はグリチルリチン酸モノアンモニウム＋１０％ラエンネック、○はグリチルリチン酸モノアンモニウム＋２０％ラエンネックを示す。コントロール（グリチルリチン酸モノアンモニウム　０μＭ）にはラエンネックは含まれていない。データは平均値±標準偏差（ｎ＝３）で示した。有意差検定はグリチルリチン酸モノアンモニウム単独に対して行った。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．００５
　図３は、実施例２において、第三段階までにＧＰＴ値が低下しなかった患者（１２４例）にラエンネックを併用したときに、ＧＯＴ（ＡＳＴ）値及びＧＰＴ値が低下したことを示す図である。
　図４は、副作用のためインターフェロン療法を中止したＣ型肝炎患者に、ペグインターフェロンαとラエンネックを併用した結果、ＧＯＴ値及びＧＰＴ値が低下し、ＨＣＶ（ヒトＣ型肝炎ウイルス）が消失したことを示す図である。なお、ＧＯＴ値及びＧＰＴ値に関し、縦軸はＩＵ／Ｌである。
　図５は、実施例４において、肝細胞癌患者の腹水が治療により消失していく経緯を示した腹部ダイナミックＣＴ画像である（その１）。
　図６は、実施例４において、肝細胞癌患者の腹水が治療により消失していく経緯を示した腹部ダイナミックＣＴ画像である（その２）。
　図７は、ラエンネックとウルソデオキシコール酸の併用によるヒト肝細胞癌増殖への抑制効果を示す図である。図中、（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）はそれぞれＨｅｐＧ２、ＨＬＥ及びＨｕｈ−７細胞を示す。また、□はウルソデオキシコール酸単独、●はウルソデオキシコール酸＋１０％ラエンネック、○はウルソデオキシコール酸＋２０％ラエンネックを示す。データは平均値±標準偏差（ｎ＝３）で示した。有意差検定はウルソデオキシコール酸単独とラエンネック単独に対して行った。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．００５
　図８はラエンネックとグルクロノラクトンの併用によるヒト肝細胞癌増殖への抑制効果を示す図である。図中、（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）はそれぞれＨｅｐＧ２、ＨＬＥ及びＨｕｈ−７細胞を示す。また、□はグルクロノラクトン単独、●はグルクロノラクトン＋１０％ラエンネック、○はグルクロノラクトン＋２０％ラエンネックを示す。データは平均値±標準偏差（ｎ＝３）で示した。有意差検定はグルクロノラクトン単独とラエンネック単独に対して行った。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．００５
　図９はラエンネックとグルタチオンの併用によるヒト肝細胞癌増殖への抑制効果を示す図である。図中、（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）はそれぞれＨｅｐＧ２、ＨＬＥ及びＨｕｈ−７細胞を示す。また、□はグルタチオン単独、●はグルタチオン＋１０％ラエンネック、○はグルタチオン＋２０％ラエンネックを示す。データは平均値±標準偏差（ｎ＝３）で示した。有意差検定はグルタチオン単独とラエンネック単独に対して行った。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．００５
　図１０はラエンネックと分岐アミノ酸の併用によるヒト肝細胞癌増殖への抑制効果を示す図である。図中、（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）はそれぞれＨｅｐＧ２、ＨＬＥ及びＨｕｈ−７細胞を示す。また、□は分岐アミノ酸単独、●は分岐アミノ酸＋１０％ラエンネック、○は分岐アミノ酸＋２０％ラエンネックを示す。データは平均値±標準偏差（ｎ＝３）で示した。有意差検定は分岐アミノ酸単独とラエンネック単独に対して行った。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．００５
　図１１はラエンネックとメチルメチオニンスルホニウムクロリドの併用によるヒト肝細胞癌増殖への抑制効果を示す図である。図中、（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）はそれぞれＨｅｐＧ２、ＨＬＥ及びＨｕｈ−７細胞を示す。また、□はメチルメチオニンスルホニウムクロリド単独、●はメチルメチオニンスルホニウムクロリド＋１０％ラエンネック、○はメチルメチオニンスルホニウムクロリド＋２０％ラエンネックを示す。データは平均値±標準偏差（ｎ＝３）で示した。有意差検定はメチルメチオニンスルホニウムクロリド単独とラエンネック単独に対して行った。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．００５

　本発明は、ヒト胎盤抽出物を含有することからなる、肝細胞癌患者のＱＯＬ改善剤である。
　本発明において、ヒト胎盤抽出物は、その抽出方法、精製法、処理方法が特に限定されるものではないが、例えば、ヒト胎盤を水洗して血液を除去し、必要に応じて脱脂した後、粉砕、凍結融解、酵素分解、酸加水分解などの常法により処理した後、不溶性成分を除去したものを挙げることができる。なお、胎盤抽出物は胎盤分解物、胎盤水解物、胎盤エキス、胎盤加水分解物などとも称される。
　医療用医薬品として製造販売中のヒト胎盤抽出物含有製品は、慢性肝疾患に適用されるものと更年期障害・乳汁分泌不全に適用されるものに大別される。慢性肝疾患に適用される医薬品は、日本では（株）日本生物製剤がラエンネック（商品名、登録商標）として、更年期障害・乳汁分泌不全に適用される医薬品は、メルスモン製薬（株）がメルスモン（商品名、登録商標）として、製造販売している。両者は製造方法が異なるため、含有成分が同じではない。
　ラエンネックは、胎盤を水洗して除血後、アセトン脱脂し、粉砕、プロテアーゼで酵素分解し、更に塩酸を使用した加熱酸加水分解し、不溶性成分を除去することにより得た製剤である。ラエンネックは、１管（２ｍｌ）当り、上記のヒト胎盤分解物の水溶性物質を１１２ｍｇ含有し、添加物としてペプシン、乳糖、ｐＨ調整剤を含有する。ラエンネックのｐＨは５．５~６．５であり、浸透圧比（生理食塩水に対する比）は約１である。ラエンネックには、蛋白質、アミノ酸の他に核酸塩基類などが含まれていること明らかになっているが、含有成分すべてが同定されているわけでない。また、含有成分のいずれが効能効果に関与しているのか、多年に亘って研究されているものの、解明されていない。
　ヒト胎盤抽出物含有製品が、医薬品として承認されている効能効果は上記のとおりであるが、ヒト胎盤抽出物含有製品は、それ以外にも多様な作用を示すことが明らかになっている。
　そのうち、癌治療に対しては、坂元らの報告１件のみである（坂元秀壮ら、第９４回日本消化器病学会九州支部例会／第８８回日本消化器内視鏡学会九州支部例会プログラム・抄録集、第１３２頁の１３３、平成２１年１１月２７日‐２８日）。当該報告では、末期の肝細胞癌患者へプラセンタ療法を行ったところ、肝細胞癌が著明に縮小したと報告している。しかし、プラセンタ療法の科学的根拠、使用した医薬品名と購入先、併用薬、用法用量、長期投与の可能性、予後、ＱＯＬ向上などを一切明らかにしていない。
　癌治療に伴う随伴症状に関しては、メルスモンを試用した都築の報告とラエンネックを試用した品川らの報告の２件がある。
　都築（都築靖、基礎と臨床１２巻１２号３４５頁、昭和５３年）は、メルスモンを胃癌（６例）、直腸癌（２例）、乳癌（１例）、前立腺癌（１例）らの患者に１日１回２ｍｌを２週間筋肉内投与したところ、胃癌患者の５例に食欲増進等の自覚症状が認められた。しかし、肝転移や全身悪液質の患者には効果は認められなかったと報告している。
　品川ら（品川和子他、第８７回日本消化器病学会北陸支部例会講演要旨集、第２８頁の２９、平成１０年）は、ラエンネックが肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）を含有していることから、肝切除後の患者の肝再生を期待してラエンネックを静脈内投与した。その結果、腹水が消失したと報告している。しかし、品川らは、肝細胞癌に対する効果、長期連続投与の可能性、ＱＯＬ向上については言及していない。なお、平成１０年当時、ラエンネックにはＨＧＦが含有されていると考えられていたが、その後の成分研究で、ラエンネックにはＨＧＦは微量しか含まれていないことが分かっている。
　ラエンネックは、昭和５９年１１月以降、慢性肝疾患の肝機能改善剤（筋肉内あるいは皮下投与）として製造販売されてきたが、肝細胞癌へ適応されることは皆無であった。その主な理由は、以下のとおりである。
・ラエンネックと同じ効能効果（慢性肝疾患に対する肝機能改善）を有する、前掲の医薬品と異なり、肝機能改善作用の機序が解明されていないこと；
・ラエンネックを肝細胞癌患者に投与する際の科学的根拠（実験データ）がないこと；
・ラエンネックと同じ効能効果（慢性肝疾患に対する肝機能改善）を有する、前掲の医薬品のうち、抗肝細胞癌作用が研究されたことのある医薬品は、その一部にすぎないこと（即ち、アデノシン三リン酸ナトリウム、フラビンアデニンジヌクレオチド、グリチルリチン酸モノナトリウム、ウルソデオキシコール酸等のみであること）；
・しかも、これら医薬品が肝細胞癌患者を含む慢性肝疾患患者のＱＯＬを向上させるとする報告が見当たらないこと。
　このような状況から、本発明者らは、
・ラエンネックを肝細胞癌患者へ適応する根拠を確立するために、ラエンネックによって癌細胞の増殖が抑制されるかを、ヒト肝癌細胞を用いて検証した。即ち、
・多くの慢性肝疾患患者に、肝機能改善剤とラエンネックを併用し、ＧＰＴ値、ＧＯＴ値等の変動を長期に亘って測定すると同時に、患者へのアンケート調査を実施し、ラエンネックの併用投与が肝機能を改善し、ＱＯＬを向上するかを検証した。
・肝細胞癌患者に、ラエンネックを筋肉内に肝機能改善剤（グリチルリチン酸モノアンモニウム）と長期に併用投与し、またラエンネックを静脈内に長期単独投与し、癌細胞の縮小、腹水の消失、自覚症状改善、ＱＯＬ向上を検査・調査した。
　これらの結果に基づき、ラエンネックが、末期の肝細胞癌患者を含めて、肝細胞癌患者にも応用しうるかを検証したところ、ラエンネックの投与は所期の目的を達成し得ることが判明した。係る検証に基づいて、本発明は完成したものである。
　本発明において、ＱＯＬの改善とは、肝細胞癌によって低下した患者の生活の質を向上させ、次いで維持させることにより、通常のヒトの生活状態により近づけることを意味する。前述のように、進行性の肝細胞癌の根治的治療が困難な状況では、抗癌剤による治療を長く続けることは逆に患者の寿命を縮めることがあり、癌が完治しなくとも延命ができ、快適な生活をおくれる方が肝要であるという発想に基づく。
　肝細胞癌により低下した患者のＱＯＬの例としては、食欲不振、体重減少、疲労感、全身倦怠、微熱、腹部膨満、腹痛、腹水、黄疸などが挙げられる。
　本発明のＱＯＬ改善剤は胎盤抽出物を含有すれば、製剤中の含有量は特に限定されず、適宜な量とすることができる。また、必要に応じて、安定化剤、酸化防止剤、ｐＨ調整剤、無痛化剤などの慣用の助剤を添加することもできる。
　本発明において、胎盤抽出物の肝細胞癌患者への投与量は、患者の疾患の程度、年齢、体重などによって、適宜選択することができるが、ラエンネックに換算して、一日１~３アンプル（１アンプル当たり胎盤由来成分１１２ｍｇ含有）を１回又は数回に分けて投与する。投与方法としては、ラエンネックが認可されている皮下投与及び筋肉内投与の他、静脈内投与（適用外使用）も可能である。
　本発明のＱＯＬ改善剤は、胎盤抽出物と共に肝機能改善剤を使用すると、それらが相乗的に作用しより優れた効果を奏する。即ち、肝細胞癌患者は、本発明のＱＯＬ改善剤と共に肝機能改善剤を投与されることが好ましい。本発明において、肝機能改善剤とは、疾患特異的な薬剤及び非特異的な薬剤を問わず、肝炎を抑え、肝機能を向上させ、肝硬変や肝癌への進行を抑制し得る薬剤を意味する。
　係る肝機能改善剤としては、疾患特異的な薬剤であるインターフェロン製剤及び核酸関連化合物製剤を含めて、以下のような例を挙げることができる。
グリチルリチン酸塩（モノアンモニウム塩、モノナトリウム塩）：例えば強力ミノファーゲンＰ（静注）（商品名）、強力ネオミノファーゲンＣ（商品名）
アデノシン三リン酸塩（ナトリウム塩）：例えばＡＴＰ注第一（商品名）
フラビンアデニンジヌクレオチド：例えばアデラビン９号注（商品名）
ウルソデオキシコール酸：例えばウルソ錠（商品名）
ジクロロ酢酸ジイソプロピルアミン：例えばリバオール錠（商品名）
グルクロノラクトン：例えばグロンサン注（商品名）
グルタチオン：例えばタチオン注（商品名）
マロチラート：例えばカンデック錠（商品名）
メチルメチオニンスルホニウムクロリド：例えばキャベジンＵコーワ（商品名）
ポリエンフォスファチジルコリン：例えばブロビーンカプセル（商品名）
プロトポルフィリン塩（２ナトリウム塩）：例えばプロルモン錠（商品名）
分岐鎖アミノ酸製剤：例えばリーバクト（商品名）
肝水解物：例えばプロヘパール錠（商品名）
インターフェロン製剤（ペグインターフェロン製剤を含む）：例えばスミフェロン（商品名）
核酸関連化合物製剤：例えばリバビリン（商品名）
　これらの肝機能改善剤は、添付文書に記載される用量用法で使用すればよい。
　なお、上記の肝機能改善剤において、グリチルリチン酸塩、ウルソデオキシコール酸、分岐鎖アミノ酸製剤、グルクロノラクトン、グルタチオン、メチルメチオニンスルホニウムクロリドが好ましく、特にグリチルリチン酸塩、ウルソデオキシコール酸が好適である。

　以下、実施例に基づいて、本発明をより詳細に説明するが、本発明はこれらの例に限定されるものではない。
実施例１
　ラエンネックとグリチルリチン酸モノアンモニウムとの併用による、生体外でのヒト肝癌細胞の増殖抑制効果を検討した。
［材料と実験方法］
試薬；胎盤抽出物としてはラエンネックを用いた。ＭＴＴアッセイはナカライより購入した。
細胞；ＨｅｐＧ２（肝癌細胞株、分化型、理化学研究所より入手）、ＨＬＥ（肝癌細胞株、未分化型、ＪＣＲＢ（Ｊａｐａｎｅｓｅ　Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｂｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅｓ）より入手）は１０％血清含有ＤＭＥＭ培地、Ｈｕｈ−７（肝癌細胞株、高分化型、東北大加齢研究所より入手）は１０％血清含有ＲＰＭＩ培地でそれぞれ培養した。
細胞増殖抑制試験；ＨｅｐＧ２（１．５×１０^３ｃｅｌｌｓ／９０μｌ／ｗｅｌｌ）、Ｈｕｈ−７（４．５×１０^３ｃｅｌｌｓ／９０μｌ／ｗｅｌｌ）及びＨＬＥ（１．０×１０^３ｃｅｌｌｓ／９０μｌ／ｗｅｌｌ）を９６穴プレートに播種して２４時間培養後、ラエンネック単独又はラエンネック及びグリチルリチン酸モノアンモニウムを添加した。４８時間後、ＭＴＴアッセイにより細胞増殖または抑制を判定した。
［結果と考察］
　ラエンネック単独はＨｅｐＧ２、ＨＬＥ及びＨｕｈ−７細胞に対して、５％添加以降において濃度依存的な増殖抑制作用を示した（図１；ａ，ｂ，ｃ参照）。
　また、ラエンネックとグリチルリチン酸モノアンモニウムの併用により有意な増殖抑制作用が示された（図２；ａ，ｂ，ｃ参照）。これらの結果より、ラエンネック、特にラエンネックとグリチルリチン酸モノアンモニウムの併用は臨床上有用である可能性が推測された。
実施例２
　Ｂ型ウイルス、Ｃ型ウイルス、非Ｂ型非Ｃ型ウイルス、その他の原因によって罹患した肝炎患者のＱＯＬが、ラエンネック投与によって向上することを、本実施例で示す。
　ウイルス性肝炎の場合、ウイルスの消失、ＧＰＴ値の低下が目標である。そのためには、副作用を少なくし、標準的治療方法（例えば、ペグインターフェロンとリバビリンとの併用療法）をいかに持続させうるかがポイントになる。
　持続療法の一環として、標準的治療方法に先行してラエンネックをＣ１型、Ｃ２型肝炎患者に投与した場合、消失したウイルスが陽性に転じる例が少なく、またペグインターフェロンによる副作用中止例が減少する可能性を吉田がすでに示唆している（吉田健太郎、日本胎盤臨床研究会研究要覧　第１号（平成２０年）、３２−３３頁、４７頁、４９−５０頁）。しかし、吉田は、ラエンネックによる患者のＱＯＬ向上については定量的なデータは公表していない。
　そこで、肝機能改善剤（ウルソデオキシコール酸とグリチルリチン酸モノアンモニウムとの併用）にラエンネックを追加し、ＧＯＴ、ＧＰＴ値の推移とＱＯＬ向上との関係を検討した。その結果、以下の知見が得られた。
ｉ）肝機能改善剤投与のレジメン
　肝機能改善剤投与など治療の対象にした肝炎患者総数（７５９例）は表１のとおりであるが、患者の自覚所見、他覚所見（血液データ、血液生化学データ等変動）から肝機能改善剤投与のレジメンは、原則、以下のとおりとした。
　第一段階：ウルソデオキシコール酸（６００ｍｇ／日）を経口投与
　第二段階：ウルソデオキシコール酸に、さらにグリチルリチン酸モノアンモニウム（４０ｍｌ~６０ｍｌ週３回）を静脈内投与
　第三段階：ウルソデオキシコール酸に併用するグリチルリチン酸モノアンモニウムを増量（６０ｍｌ~１００ｍｌ週３回）
　第四段階：ウルソデオキシコール酸、グリチルリチン酸モノアンモニウムに、さらにビタミンＣ（６００ｍｇ経口）、ビタミンＥ（３００ｍｇ経口）、ラエンネック（筋肉内に週２回、１~３アンプル）併用
ｉｉ）臨床効果
ｉｉ−１）ＧＯＴ・ＧＰＴ値の推移
　肝炎患者総数（７５９例）のうち、第三段階までにＧＰＴ値が低下しない患者は１２４例であった。そこで、これら患者にラエンネックを平成１９年３月から平成２１年８月の２３カ月に亘って併用すると、１１３例（男性：５２例、女性：６１例）にＧＰＴ値の低下を認めた（図３参照）。
ｉｉ−２）自覚症状を改善（ＱＯＬの向上）
　ラエンネックを併用した１２４例のうちの５８例（表２）から自覚症状の変化（ＱＯＬの向上）に関するアンケートを回収することができた。
　アンケートの結果は表３のとおりであるが、非代償性肝硬変のような不定愁訴が多い症状を明らかに改善することが分かり、ＧＰＴ値等の低下とＱＯＬの向上に関連性があることを明らかにすることができた。
　自覚症状を改善することから、８９％の患者はラエンネックの併用を引き続き希望していることも分かった。

ｉｉ−３）インターフェロンとの併用
　ラエンネックにＱＯＬ向上効果があることから、副作用が多発するインターフェロン療法との併用の有用性が示唆された。そこで、副作用のため、ペグインターフェロンα療法を中止したＣ型肝炎患者に、ペグインターフェロンαとラエンネック（１回３アンプル、筋肉内投与）との併用を試みた。その結果、併用開始後から、ＧＯＴ・ＧＰＴ値が低下し、ＨＣＶも消失した（図４参照）。
ｉｉ−４）副作用
　ラエンネックを併用した患者１２４例のいずれにも重篤な副作用はなく、全身浮腫が１例、眠気が２例、全身掻痒感が５例見られた程度であった。
［結論］
　ラエンネックを、肝機能改善剤（ウルソデオキシコール酸、グリチルリチン酸モノアンモニウム等）と併用すると、長期治療が可能になり、結果として、血液学的所見のみならず、ＱＯＬを著しく向上、肝機能を改善することが分かった。
　また、Ｃ型肝炎患者に対するインターフェロン療法にラエンネックを併用すると、インターフェロン療法による副作用が軽減し、肝機能を改善する知見も得た。
実施例３
　Ｃ型肝炎（ジェノタイプ２ａ）、代償性肝硬変、びまん性肝細胞末期癌に罹患した５０歳代の男性で、広島県のある病院で余命１カ月と宣告され、平成１９年４月９日に来院した。全身倦怠感、食欲不振等の自覚症状があり、顔面は茶色化していた。
平成１９年４月２０日：患者さんの同意を得て、ラエンネック（１回１アンプルの隔日筋肉内）とグリチルリチン酸モノアンモニウム（隔日に３アンプル静脈内）の併用投与を開始。ＵＦＴ（テガフール・ウラシル、毎日２錠経口投与）も処方した。その結果を経時的に示す。
・平成１９年１０月５日以降：ＧＯＴ、ＧＰＴ、γ−ＧＴＰ、ＡＦＴ、ＰＩＶＫＡ−ＩＩの各値が正常化。
・平成２０年６月２１日：びまん性肝細胞癌が著明に縮小し（ＣＴ検査）、それまで認めていた右側腹部の圧痛が消失したので、ラエンネックの投与を中止。
・平成２０年１０月１日：ＰＩＶＫＡ−ＩＩ値が上昇したので、ラエンネックの投与を再開。ラエンネックの投与量は週１回１アンプル。
・平成２１年１２月２８日以降：ラエンネックを週１回１アンプル、グリチルリチン酸モノアンモニウムを週１回３アンプル投与。ＵＦＴも毎日２錠処方。
・平成２２年２月２日現在：平成２１年１２月２８日時点に比べ、ＡＦＴ値は若干上昇、ＰＩＶＫＡ−ＩＩ値は変化せず。
・平成１９年４月２０日のラエンネックの併用投与開始後、特記すべき副作用は発生していない。この間の肝機能検査、血液検査データは表４にまとめた。
　患者のＱＯＬの改善度は、ラエンネックの併用投与開始約３カ月後、約６カ月後、約１２カ月後にＳＦ−３６（ＭＯＳ　３６　Ｉｔｅｍ−Ｆｏｒｍ　Ｈｅａｌｔｈ　Ｓｕｒｖｅｙ，登録商標）を用いて測定した結果、健康状態は時間とともに明らかに改善されていることが分かった（表５参照）。患者はすでに職場復帰しており、平成１９年４月以降、３６か月経過した平成２２年４月現在も健康状態は良好である。

［結論］
　実施例１で示した実験データ（図２；ａ，ｂ，ｃ）、即ち、ラエンネックをグリチルリチン酸モノアンモニウムと併用すると、抗肝癌作用が増強されることが臨床でも実証された。
　なお、臨床の場では、グリチルリチン酸モノアンモニウムを長期間静脈内に投与するとＱＯＬが低下し、投与を断念せざるを得ないことを経験する。したがって、ＱＯＬ改善・維持のためには、ラエンネックとの併用が必要と結論付けられた。これは、実施例２で示されたラエンネックによる慢性肝疾患患者のＱＯＬ向上の知見と符合する。
実施例４
　症例は５０歳代男性で、２５歳時に交通事故で輸血歴あり。特に著患なく仕事をしていた。平成２０年９月、全身倦怠感、腹部膨満、腹部不快を主訴に来院した。来院時腹部超音波検査で多量の腹水を認め、採血でＨＣＶ陽性および肝機能低下を認めた。肝硬変重症度分類（Ｃｈｉｌｄ−ｐｕｇｈ）スコアは１０点であった。他の医療機関に入院して肝庇護療法を行ったが、腹水は軽度減少したのみにとどまった。
　退院後、当院で平成２０年１０月からラエンネックを１回１アンプル、６回／週の割合で静脈内に慎重に点滴投与した。
　その後腹部ＣＴ検査でＳ６に肝細胞癌が発見された。投与２ヵ月後の平成２０年１２月には腹水の減少が見られ、平成２１年３月には腹水はほぼ消失した。腹部ＣＴでも肝臓容量の増加をみとめ肝機能も軽快し、肝硬変重症度分類（Ｃｈｉｌｄ−ｐｕｇｈ）スコアは、来院当初の１０点から、６点に好転した。
　そこで、肝細胞癌に対し血管造影にて血管塞栓術を施行した。治療後軽度腹水は出現したものの、その後消失し、退院後、ラエンネック投与を再開し現在１９ヶ月を経過しているが、肝細胞癌の再発および肝機能の悪化、腹水の出現はなく経過は良好である。
　来院時（平成２０年９月）と腹水がほぼ消失した時点（平成２１年４月）での血液検査等のデータを表６に、平成２０年１０月から平成２１年１０月までの腹部ダイナミックＣＴの画像の変化を図５及び図６に示す。
　なお、特記すべき副作用は発生しなかった。
［結論］
　ラエンネックは、静脈内に慎重に長期間点滴投与すれば、単独投与でも肝細胞癌の再発を抑制し、肝機能を著明に改善させる可能性があることを見出した。これらの知見は、実施例１で示した図１；ａ，ｂ，ｃの結果を立証したものになっている。
実施例５
　ラエンネックとウルソデオキシコール酸との併用による、生体外でのヒト肝癌細胞の増殖抑制効果を検討した。材料と実験方法は、実施例１の材料と実験方法と同様である。なお、試験は独立して６回実施した。
［併用効果の有無の判定］
　併用効果の有無の判定は以下のように行った。
　「ラエンネック単独」と「ラエンネックとウルソデオキシコール酸との併用」について有意差検定を行い、ｐ＜０．０５を示した群をプールした（プール１）。
　続いて、「ウルソデオキシコール酸単独」と「ラエンネックとウルソデオキシコール酸との併用」について、有意差検定を行い、ｐ＜０．０５を示した群をプールした（プール２）。
　プール１とプール２の両者間でｐ＜０．０５を示した群を「併用効果あり」と判定した。
［結果と考察］
　試験結果を図７に示す。図７に示されるように、ウルソデオキシコール酸に１０％、２０％ラエンネックを併用すると、ＨｅｐＧ２、ＨＬＥ及びＨｕｈ−７の何れの癌細胞に対しても、明らかな増殖抑制効果を示すことが判明し（図７の（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）参照）、両薬物の併用は臨床上有用であると推測された。
実施例６
　ラエンネックとグルクロノラクトンとの併用による、生体外でのヒト肝癌細胞の増殖抑制効果を検討した。材料と実験方法及び併用効果の有無の判定は、実施例５と同様である。
　試験結果を図８に示す。図８に示されるように、グルクロノラクトンに１０％ラエンネックを併用すると、ＨｅｐＧ２及びＨｕｈ−７の癌細胞に対しては有意性のある増殖抑制効果を示さなかったが、ＨＬＥに対しては顕著な抑制効果を示した（図８の（ｂ）の●参照）。
実施例７
　ラエンネックとグルタチオンとの併用による、生体外でのヒト肝癌細胞の増殖抑制効果を検討した。材料と実験方法及び併用効果の有無の判定は、実施例５と同様である。
　試験結果を図９に示す。図９に示されるように、グルタチオンに１０％ラエンネックを併用すると、ＨｅｐＧ２及びＨｕｈ−７の癌細胞に対しては有意性のある増殖抑制効果を示さなかったが、ＨＬＥに対しては顕著な抑制効果を示した（図９の（ｂ）の●参照）。
実施例８
　ラエンネックと分岐アミノ酸との併用による、生体外でのヒト肝癌細胞の増殖抑制効果を検討した。材料と実験方法及び併用効果の有無の判定は、実施例５と同様である。なお、ここで分岐アミノ酸としては、ロイシン：イソロイシン：バリン＝２：１：１．２（モル比）の組成からなるアミノ酸製剤を使用した。
　試験結果を図１０に示す。図１０に示されるように、分岐アミノ酸に１０％ラエンネックを併用すると、ＨｅｐＧ２及びＨｕｈ−７の癌細胞に対しては有意性のある増殖抑制効果を示さなかったが、ＨＬＥに対しては顕著な抑制効果を示した（図１０の（ｂ）の●参照）。
実施例９
　ラエンネックとメチルメチオニンスルホニウムクロリドとの併用による、生体外でのヒト肝癌細胞の増殖抑制効果を検討した。材料と実験方法及び併用効果の有無の判定は、実施例５と同様である。
　試験結果を図１１に示す。図１１に示されるように、メチルメチオニンスルホニウムクロリドに１０％ラエンネックを併用すると、ＨｅｐＧ２及びＨｕｈ−７の癌細胞に対しては有意性のある増殖抑制効果を示さなかったが、ＨＬＥに対しては顕著な抑制効果を示した（図１１の（ｂ）の●参照）。

　本発明のＱＯＬ改善剤によれば、肝癌細胞を縮小させ、患者の自覚症状を改善し、ＱＯＬを向上させることができるので、末期の肝細胞癌も含めて肝細胞癌の治療において有用である。特に、本発明のＱＯＬ改善剤は、肝機能改善剤と併用すると、それらの相乗効果により肝細胞癌の増殖を顕著に抑制し得るので、肝細胞癌の治療に有用である。

Claims

　ヒト胎盤抽出物を含有することを特徴とする、肝細胞癌患者のＱＯＬ（Ｑｕａｌｉｔｙ　ｏｆ　ｌｉｆｅ）改善剤。
　肝細胞癌患者が、肝機能改善剤を投与されている請求項１記載のＱＯＬ改善剤。
　肝機能改善剤が、グリチルリチン酸塩、アデノシン三リン酸塩、フラビンアデニンジヌクレオチド、ウルソデオキシコール酸、ジクロロ酢酸ジイソプロピルアミン、グルクロノラクトン、グルタチオン、マロチラート、メチルメチオニンスルホニウムクロリド、ポリエンフォスファチジルコリン、プロトポルフィリン塩、分岐鎖アミノ酸製剤、肝水解物、インターフェロン製剤及び核酸関連化合物製剤から選ばれた少なくとも１種である請求項２記載のＱＯＬ改善剤。
　ヒト胎盤抽出物がラエンネック（商品名、登録商標）である請求項１~３記載のＱＯＬ改善剤。
　ヒト胎盤抽出物の有効量を、肝細胞癌患者に投与する工程を含む、ＱＯＬの改善方法。
　肝細胞癌患者が、肝機能改善剤を投与されている請求項５記載のＱＯＬの改善方法。
　肝機能改善剤が、グリチルリチン酸塩、アデノシン三リン酸塩、フラビンアデニンジヌクレオチド、ウルソデオキシコール酸、ジクロロ酢酸ジイソプロピルアミン、グルクロノラクトン、グルタチオン、マロチラート、メチルメチオニンスルホニウムクロリド、ポリエンフォスファチジルコリン、プロトポルフィリン塩、分岐鎖アミノ酸製剤、肝水解物、インターフェロン製剤及び核酸関連化合物製剤から選ばれた少なくとも１種である請求項６記載のＱＯＬの改善方法。
　ヒト胎盤抽出物がラエンネック（商品名、登録商標）である請求項５~７記載のＱＯＬの改善方法。
　肝細胞癌患者のＱＯＬを改善するための剤を調製するためのヒト胎盤抽出物の使用。